荧光分光光度计工作原理及应用

荧光分光光度计是最常见的实验仪器，首要用于对经光源激起后产生荧光的物质或经化学处理后产生荧光的物质成份剖析。在检测食品安全、自然环境污染等重要的人类课题上，发挥积极的作用。荧光分光光度计是用于扫描液相荧光标记物所发出的荧光光谱的一种仪器，有滤光片荧光计、滤光片-单色器荧光计等，通常均由以下四个部分组成：激起光源、用于挑选激起光波长和荧光波长的单色器、样品池及测量荧光的检测器。

荧光度计工作原理

一、激起光源

对激起光源首要考虑其稳定性和强度，因为光源的稳定性直接影响测量的重复性和精确度，而光源的强度又直接影响测定的灵敏度。荧光测量中常用的光源包含高压汞灯或氙灯。氙灯产生激烈的连续辐射，其波长范围在250~700nm；高压汞灯发射365 nm、405 nm、436 nm、546 nm、579 nm、690nm和734 nm的线状谱线，测量中常用365 nm、405 nm、436 nm三条谱线。现在大部分荧光分光光度计都选用150W和500W的氙灯作光源；现代荧光仪器有选用12 V50W的新式溴钨灯作光源，在300~700nm波段发射连续光谱。此外，20世纪70年代开端用激光作为激起光源，激光光源单色性好、光强度大、脉冲激光的光照时间短，能够防止某些感光物质的分解。

二、单色器

荧光剖析仪器有两个单色器，激起单色器（第一单色器）和荧光单色器（第二单色器）。第一个单色器的效果是将不需要的光除掉，使需要的激起光透过而照射到样品池，第二个滤光片将由激起光所产生的反射光、瑞利散射光、拉曼散射光和由溶液中杂质所产生大多数的荧光滤去。滤光片荧光计选用滤光片做单色器，结构简单，价格便宜，用于已知组分样品的定量剖析，不能供给激起光谱或荧光光谱。荧光分光光度计都选用光栅分光，能够获得单色性好的激起光，并能分出某一波长的荧光，以削减搅扰，并且能够扫描激起光谱或荧光光谱。

三、样品池

荧光剖析用的样品池须用低荧光材料制成，通常用石英，四面均透光。形状有正方形、长方形或圆形，但常用正方形样品池，因其散射干扰较少。

四、检测器

荧光分光光度计中的检测器有较高的灵敏度，一般用光电倍增管（PMT）做检测器。为了消除激起光对荧光测量的干扰，在仪器中，检测光路与激起光路是相互垂直的。紫外分光光度计

现在，荧光分光光度法在各个范畴内得到广泛应用：诸如有机电致发光和液晶等工业材料；水质剖析等环境相关领域；荧光试剂的合成与开发等制药领域；细胞内钙离子浓度测定等生物技术相关领域。